SK-MES-1人肺鱗癌細(xì)胞培養(yǎng)操作說(shuō)明：

1)對(duì)于常溫運(yùn)輸?shù)募?xì)胞，收到細(xì)胞后，檢查是否有運(yùn)輸問(wèn)題，即細(xì)胞培養(yǎng)瓶或管是否破損，細(xì)胞培養(yǎng)液是否溢出。若沒(méi)有運(yùn)輸問(wèn)題，請(qǐng)75%酒精消毒后，保留封口膜，放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置。嚴(yán)格檢查培養(yǎng)箱的參數(shù)：溫度，濕度和CO2濃度。細(xì)胞靜置時(shí)間一般為6-12小時(shí)后，細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定后，即可開(kāi)始后續(xù)操作。選用正確的細(xì)胞培養(yǎng)體系，A2780(人卵巢癌細(xì)胞)嚴(yán)格按照說(shuō)明書的培養(yǎng)條件進(jìn)行培養(yǎng)。條件允許，培養(yǎng)的前三天內(nèi)做細(xì)胞拍照記錄，通過(guò)郵件發(fā)送給我們做及時(shí)狀態(tài)跟蹤。

2)對(duì)于干冰運(yùn)輸?shù)募?xì)胞，請(qǐng)取出冷凍管后，須立即放入37C水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1分鐘內(nèi)全部融化，并注意水面不可超過(guò)冷凍管蓋沿，否則易發(fā)生污染情形。然后將其復(fù)蘇培養(yǎng)，次日更換培養(yǎng)液。

3) 在細(xì)胞復(fù)蘇及培養(yǎng)過(guò)程中，務(wù)必保持無(wú)菌操作環(huán)境，使用前對(duì)超凈工作臺(tái)進(jìn)行紫外燈照射消毒至少30分鐘，并穿戴好實(shí)驗(yàn)服、手套及口罩。復(fù)蘇后的細(xì)胞需用新鮮預(yù)熱的培養(yǎng)基輕輕吹打均勻，避免產(chǎn)生氣泡，隨后接種至已預(yù)熱的培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中，細(xì)胞密度控制在適宜范圍內(nèi)，以保證良好的生長(zhǎng)狀態(tài)。

4) 定期檢查細(xì)胞生長(zhǎng)情況，包括形態(tài)學(xué)觀察、貼壁情況及培養(yǎng)基顏色變化。若培養(yǎng)基變黃或細(xì)胞密度過(guò)高，應(yīng)及時(shí)更換新鮮培養(yǎng)基或進(jìn)行傳代培養(yǎng)。傳代時(shí)，采用適當(dāng)?shù)囊让赶瘯r(shí)間，避免過(guò)度消化導(dǎo)致細(xì)胞損傷，同時(shí)控制傳代比例，維持細(xì)胞活力。

5) 在進(jìn)行任何藥物處理、基因編輯或細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn)前，建議設(shè)立對(duì)照組，以準(zhǔn)確評(píng)估實(shí)驗(yàn)效果。對(duì)照組細(xì)胞應(yīng)與實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞在相同條件下培養(yǎng)，僅不施加實(shí)驗(yàn)因素。此外，記錄實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的關(guān)鍵步驟、時(shí)間點(diǎn)和觀察結(jié)果，為后續(xù)數(shù)據(jù)分析提供可靠依據(jù)。

6) 考慮到細(xì)胞培養(yǎng)的長(zhǎng)期性和穩(wěn)定性，建議定期凍存細(xì)胞，以保留細(xì)胞株的遺傳特性和生物學(xué)功能。凍存前，選擇生長(zhǎng)狀態(tài)良好的細(xì)胞，按照標(biāo)準(zhǔn)凍存程序進(jìn)行，確保細(xì)胞在液氮中長(zhǎng)期保存后的復(fù)蘇率和活性。

7) 最后，所有細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)的廢棄物，包括培養(yǎng)基、廢液、使用過(guò)的耗材等，均需按照實(shí)驗(yàn)室生物安全規(guī)定進(jìn)行處理，防止交叉污染和潛在的環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)。通過(guò)嚴(yán)格遵守上述操作說(shuō)明，可以確保SK-MES-1人肺鱗癌細(xì)胞培養(yǎng)的成功率和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。